当前位置:首页  >  技术文章  >  Kromasil液相色谱柱冲洗与维护

Kromasil液相色谱柱冲洗与维护

更新时间:2023-05-26  |  点击率:729

液相色谱柱是色谱分析中关键的耗材之一,色谱柱的状态对实验结果影响也是有所影响。日常分析时色谱柱的污染却在所难免。色谱柱被污染后,通常会导致一系列的分析问题,比如压力高、基线不稳、峰型差等。此时正确的冲洗和维护色谱柱就显得十分重要了。

                                             

一、柱体积的计算

我们在一些冲洗方法的资料中,经常会看到10倍柱体积或者20倍柱体积的说法。那么柱体积应该如何计算呢?我们可以把色谱柱想象为一个圆柱形,因此可以参考圆柱形计算公式。

V=πr2L

V=色谱柱体积(mL)  r=色谱柱半径(cm)  L= 色谱柱长度(cm)



常规250*4.6mm的规格,柱体积经计算为4.15mL,以1mL/min的流速10倍柱体积就是42min左右。以下是一些常见规格的柱体积值,可作为参考。

b0154bbd25711329fc75bf69fdf8d2e.png

 

二、Kromasil反相C18柱的冲洗

反相C18柱是我们日常实验中应用广泛的固定相之一,首先我们先从反相C18柱的常见情况冲洗进行介绍,分别是:一般污染的冲洗、使用缓冲盐后的冲洗、生物样品分析后的冲洗。


1、一般污染的冲洗

一般污染是指的是我们每次分析使用后常见的污染情况,例如试剂和样品杂质对色谱柱产生的污染,或者是一些聚合物的形成等。

①   高比例的水相(例如:10%甲醇/乙腈-水溶液)冲洗10倍柱体积。这样可以将残留在色谱柱中的缓冲盐和一些极性化合物冲洗干净;

②   高比例的有机相(例如:80%甲醇/乙腈-水溶液)冲洗10-20倍柱体积。高比例有机相可以将一些疏水性的杂质冲洗干净;

③   如果执行上述冲洗之后还是污染问题没有被解决,可以选择异丙醇冲洗10-20倍柱体积。


2、使用缓冲盐后的冲洗

流动相中时常会加入一些缓冲盐,这些缓冲盐可能会在色谱柱中析出,导致柱压升高等问题,影响后续使用。

①   开启柱温箱,高比例的水相(例如:10%甲醇/乙腈-水溶液)冲洗20倍柱体积;

②   以未加入缓冲盐的方法起始比例流动相进行平衡。


3、生物样品污染

生物分析实验中,通常前处理较为复杂,导致样品无法处理干净。可能会残留小分子肽等物质,其会吸附在色谱柱的管壁或者筛板上,造成柱压高、峰型差、分离度降低等问题。

①   在流动相的有机相中加入0.1%的三氯乙酸,以增强对吸附蛋白质的洗脱;

②   如果问题仍未解决,可尝试在色谱柱里面进100uL三氮乙醇,尝试清洗强保留的蛋白


三、Kromasil色谱柱冲洗指南

关于其他常见色谱柱的冲洗方法,可按照以下提示进行尝试,若使用其他品牌的色谱柱请和厂商工程师确认后进行参考。


1、反相柱的冲洗

使用10倍柱体积的如下溶剂依次清洗

①   90%水-乙睛溶液

②   100%四氢呋喃

③   95%乙腈-水溶液

④   不含盐的初始比例流动相

⑤   初始比例流动相平衡


2、正相柱的冲洗-硅胶柱

使用10倍柱体积的如下溶剂依次清洗

①   异丙醇

②   甲醇

③   乙酸乙酯

④   流动相


3、正相柱的冲洗-氰基柱、二元醇基柱

使用10倍柱体积的如下溶剂依次清洗

①   三氯甲烷

②   异丙醇

③   二氯甲烷

④   流动相


色谱柱污染在日常分析中在所难免,因此可以考虑购买Kromasil保护柱来进行预防。Kromasil保护柱采用分析柱相同填料填充,不增加死体积与不改变分离的同时,可以有效保护分析柱,延长使用寿命。

image.png

 

 

Kromasil液相色谱柱开放试用中,委托分析开放报名中,详情可咨询当地经销商或点击下方“我要报名”留下您的信息,我们的技术人员将尽快与您联系

 

ABOUT US 鲲霆生物


 上海鲲霆生物科技有限公司深耕生物医药行业多年,自创立之初就以为生物医药企业提供从研发分析到工业生产的整体化服务为愿景。不断钻研色谱分析及制备技术,提升服务品质,致力于成为值得信赖的色谱技术服务提供商。

鲲霆生物现为Nouryon旗下品牌Kromasil液相色谱柱及制备填料中国区总代理。主营业务为代理销售各类实验室精密仪器、试剂耗材以及相关领域的技术开发与咨询服务。

鲲霆生物愿与您携手同行,共同前进,为更健康,更安全的生物医药而不懈努力。

 

9e70a2da5b34aa110495c5512e150a9.png