Kromasil色谱柱是一种常用于液相色谱(HPLC)的高性能色谱柱,广泛应用于化学和生物分析。使用Kromasil色谱柱时,可以遵循以下指南,以确保其最佳性能和延长使用寿命:
1.选择合适的色谱柱
根据样品的性质(极性、分子量等)和分析目的选择合适的Kromasil色谱柱型号。常见的类型有C18、C8、Phenyl等。
2.准备工作
清洁设备:确保色谱系统和管路没有残留物质,避免交叉污染。
溶剂准备:使用高纯度的溶剂,确保溶剂在使用前经过过滤。
脱气处理:对流动相进行脱气处理,以消除气泡,避免影响分离效果。
3.柱前准备
平衡柱子:在首次使用或更换流动相前,使用相应的流动相进行柱子的平衡。通常需要运行30分钟到1小时,直到基线稳定。
温度控制:如果需要,确保色谱柱在规定的温度范围内工作。
4.样品处理
样品浓度:确保样品浓度适当,避免过高导致柱子过载。
过滤样品:使用0.45或0.2微米的滤膜过滤样品,去除颗粒物,以保护柱子。
5.操作条件设置
流速设定:根据柱子的规格和样品特性设定合适的流速。一般推荐的流速是柱子直径和固定相颗粒大小的函数。
检测波长:选择合适的检测波长以提高检测灵敏度。
6.数据采集与分析
在运行过程中,实时监控色谱图,确保无异常峰出现。
对获得的数据进行整理和分析,确认结果的重复性和准确性。
7.后处理与清洗
清洗柱子:在分析结束后,用适当的清洗溶剂冲洗色谱柱,去除残留物质。对于强极性物质,可能需要用不同极性的溶剂进行洗脱。
储存:将柱子储存在干燥、阴凉的环境中,避免阳光直射和极端温度。
8.维护与保养
定期检查柱子的性能,监测柱压和柱效,及时进行维护。
遇到柱效下降或基线噪声增加时,考虑进行再生或更换柱子。
9.注意事项
避免使用pH值超过柱子耐受范围的流动相,通常KromasilC18柱子耐受的pH范围为2-8。
避免高温或高压操作,以防损坏色谱柱。